大部分EL ISA檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按慣例方法收集應(yīng)留意防止溶血紅細(xì)胞溶解時(shí)會釋放出具有過氧化物酶活性的物貢以HRP為符號的EL ISA測定中溶血標(biāo)本可能會添加啡特異性顯色。 血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測。如有污染菌體中可能含有內(nèi)源性HRP也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。

一般說來在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4C。 超越-周測定的需 20°C保存. 凍住血清融解后蛋白質(zhì)局部濃縮散布不均應(yīng)充沛混勻并防止發(fā)生氣泡。混濁或有沉積的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾弄清后再檢測。 重復(fù)東融會使抗體效價(jià) 下跌所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作展次檢測宜少量分裝冰存。 保存血清自收集時(shí)就應(yīng)留意無菌操作 也可參加適當(dāng)防腐劑。

EL ISA試劑盒檢測血清的詳細(xì)留意事項(xiàng):

1.要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)峻溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)其有類似過氧化物的活性 因而在以HRP為符號酶的ELISA測定中如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高則其就很簡單在溫育過程中吸附于固相 然后與后邊參加的HRP底物反應(yīng)顯色。

2.冰凍保存的血清標(biāo)本須置意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果然后引起假陰性結(jié)果。 此外凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意 ，不要進(jìn)行劇烈振蕩重復(fù)倒置混勻即可。

3.標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)菌體污染所造成的的混油或駕狀物時(shí)應(yīng)離心沉積后取上清檢測。

4.樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止菌體污染則菌體的成長 其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;-則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作符號的測定方法發(fā)生非特異性攪擾。

5.血清標(biāo)本如是以無菌操作別離則可以在2 ~8C下保存周如為有菌操作 則主張冰凍保存。 樣本的長期保存應(yīng)在70°C以下。

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以上是淺談EL ISA檢測血清注意事項(xiàng)您知道了嗎？