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    *人兒茶酚胺ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明

    發(fā)布時(shí)間: 2015/5/25  點(diǎn)擊次數(shù): 819次
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    本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:血清

    試驗(yàn)原理:

    CA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).人兒茶酚胺ELISA檢測(cè)試劑盒已知CA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將CA和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中CA的濃度呈比例關(guān)系。

    自備材料

    蒸餾水。
    加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
    振蕩器及磁力攪拌器等。

    安全性

    避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
    實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
    不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

    操作注意事項(xiàng)

    試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
    實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
    不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
    使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
    使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
    洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
    底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
    加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
    按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

    樣品收集、處理及保存方法

    血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
    血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
    細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
    保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,人兒茶酚胺ELISA檢測(cè)試劑盒避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。


    試劑的準(zhǔn)備

    標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。

    洗滌緩沖液(50×)的稀釋?zhuān)赫麴s水50倍稀釋。

    操作步驟

    使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
    根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
    加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
    甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
    每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
    甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
    每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
    取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
    在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

    局限

    6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到的結(jié)果。

    試劑盒性能

    1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。

    2. 特異性:不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。

    3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

    結(jié) 果 判 斷 與 分 析

    1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

    2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的CA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的CA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

    3、檢測(cè)值范圍:0-8.0umol/L

    4、敏感度: 0.01 umol/L
    豚鼠血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒現(xiàn)貨    ,英文名:    plaet factor 3, PF3 ELISA Kit    ,規(guī)格:    96T/48T
    豚鼠凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA    ,英文名:    prothrombin fragment 1+2,F(xiàn)1+2 ELISA Kit    ,規(guī)格:    96T/48T
    豚鼠血紅蛋白C(HbC)ELISA試劑盒現(xiàn)貨現(xiàn)貨    ,人兒茶酚胺ELISA檢測(cè)試劑盒英文名:    Hemoglobin C,HbC ELISA Kit    ,規(guī)格:    96T/48T
    豚鼠纖維蛋白(Fibrin)ELISA試劑盒現(xiàn)貨現(xiàn)貨    ,英文名:    Fibrin ELISA Kit    ,規(guī)格:    96T/48T
    豚鼠血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)ELISA試劑盒現(xiàn)貨現(xiàn)貨    ,英文名:    fibrinopeptide B,F(xiàn)PB ELISA Kit    ,規(guī)格:    96T/48T
    豚鼠纖溶酶原激活劑(PLGA)ELISA試劑盒現(xiàn)貨現(xiàn)貨    ,英文名:    plasminogen activator,PLGA ELISA Kit    ,規(guī)格:    96T/48T
    豚鼠細(xì)胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA試劑盒現(xiàn)貨現(xiàn)貨    ,英文名:    Surface Membrane Immunoglobulin,SmIg ELISA Kit    ,規(guī)格:    96T/48T
    豚鼠前白蛋白(PA)ELISA試劑盒現(xiàn)貨現(xiàn)貨    ,英文名:    prealbumin,PA ELISA Kit    ,規(guī)格:    96T/48T
    豚鼠類(lèi)白細(xì)胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒現(xiàn)貨    ,英文名:    leukocyte antigen G,HLA-G ELISA Kit     ,規(guī)格:    96T/48T
    豚鼠補(bǔ)體片斷3b(C3b)ELISA試劑盒現(xiàn)貨    ,英文名:    Complement fragment 3b,C3b ELISA Kit    ,規(guī)格:    96T/48T
    豚鼠游離蛋白S(FP-S)ELISA試劑盒現(xiàn)貨    ,英文名:    Free Protein S,F(xiàn)P-S ELISA Kit    ,規(guī)格:    96T/48T

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