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怎么挑選到合適自己試驗的抗體
發布時間： 2017-10-20 點擊次數： 1450次一、關于特異性的挑選：特異性的挑選首要需求考慮四個方面：蛋白特異性、種屬特異性、試驗辦法特異性、符號物的特異性。
1、蛋白特異性：針對需求檢測的蛋白查找抗體，幾個細節要差異，重組表達的蛋白和內源性蛋白的檢測，對抗體的要求是不一樣的，留意檢查抗體闡明書的檢測闡明。如果重組蛋白不是全長表達，則需求留意抗體的免疫原區域是否在重組蛋白區域內。內源性蛋白能清楚其剪切與潤飾的辦法，特別表型的蛋白需求進行序列比對，并結合抗體免疫原序列，檢查穿插反響的狀況。磷酸化蛋白檢測需求斷定詳細位點，不同位點的磷酸化意味著可能有不同的機制存在，不宜混為一談。
2、種屬特異性：同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。現在大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或規劃多肽抗原的，依據蛋白的同源性的狀況與其他種屬發作穿插反響。需求參照闡明書注明的可反響種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體，能夠經過蛋白的序列比對，挑選同源序列免疫的抗體，不過一般這種狀況生產商不會受理其關于質量的申述，如果能夠申請到免費的抗體樣品，則利于抗體挑選。
3、試驗辦法特異性：現在運用抗體的試驗辦法有許多，不同的運用辦法過程中，由于對蛋白樣品的處理辦法不一樣，蛋白的含量有差異，對抗體的辨認表位和效價要求都是不一樣的。詳細的依據闡明書注明的產品應用辦法進行挑選。可是生產商一般不會將每個抗體都進行各種試驗的檢測，現在檢測比較多的僅僅WB、IHC、IF等，如果針對詳細的試驗辦法沒有找到適宜的抗體的，能夠結合蛋白序列剖析和抗體的抗原信息，挑選盡可能有作用的抗體。相同，申請到免費的抗體樣品是個很好的途徑。
4、符號物的特異性一般依據試驗操作的試驗辦法不會運用帶有符號的一抗，比方WB、IHC等，都是經過二抗類的試劑符號到達成果出現的意圖。可是依據儀器剖析的一些試驗，可能就會運用到直接符號的一抗，比方流式試驗。那么需求了解到自己即將運用的儀器能檢測到的熒光規模，不通的參數要求挑選對應的符號物。在免疫熒光雙標試驗中，需求選配不同的熒光物。
二、抗體種屬來歷的挑選：有人認為單抗比多抗好，其實這并不是一個謹慎的觀念，只能說在可能性上單抗的特異性更好一些，而多抗的親和力會優于單抗，而且特異性并不必定就遜于單抗，首要看抗原的規劃水平。現在商品化抗體里單抗首要是鼠單抗、兔單抗，多抗首要是兔多抗、山羊多抗等，其他種屬來歷抗體較少。不主張糾結于單抗好仍是多抗好，能做出試驗的抗體就是好抗體。在挑選上一般主張試驗種屬和抗體種屬親緣性越遠越好，不宜同源。抗體不同種屬會要影響接下來二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標試驗中，需求在差異于試驗種屬的基礎上，差異開兩個目標的抗體種屬來歷，以便于二抗差異辨認。
三、關于性價比的挑選：抗體的質量凹凸zui終仍是需求經過試驗成果來出現的，可是在挑選抗體之前我們并無法準確判別抗體的作用怎么。不論什么品牌的，不論進口仍是國產的，都會有用得不錯的產品，也都會有做不出來的產品。抗體歸于異質化產品，不同品牌之間，乃至同一品牌的不同產品之間，抗體質量差異都較為明顯，而且沒有統一的衡量標準。這是抗體挑選中zui難的一個問題。許多人習慣于依據試驗室傳統認識或參考文獻上運用的產品進行挑選，可是由于不同批次間的抗體作用也是有差異的，所以并不能*保證正確挑選。在這種狀況下，抗體的售后就尤為重要，遇到抗體質量障礙時，能夠保證有效地解決問題，不至于影響試驗的發展。現在有部分品牌能夠供給免費的抗體小樣的，無疑對這個問題是一個很好的解決方案。先斷定抗體是否合適自己的試驗，能夠防止由于抗體質量投訴耽擱試驗組織。在價格方面，需求謹記，zui貴的不必定就是的，zui合適你的試驗的才是的。花許多錢買到很貴的抗體，再花上很長的時刻去投訴的狀況并不罕見。只買對的，不買貴的。在挑選價格的時分還要留意標準大小、抗體濃度、效價規模等，要歸納考慮。在標準方面，依據zui終能夠稀釋成的工作液的量的來衡量更為準確。許多老品牌供給的抗體產品基本都是以大包裝為主，就單個課題的試驗而言，過大的包裝有時會形成很大的浪費。現在Proteintech、Bioworld、CellSignal等品牌都相繼推出小包裝的抗體，這在必定程度上給挑選者更大的挑選自由度，能夠依據運用產品的效價，計算出自己實際需求的抗體量，做到精斷定量收購。
四、關于品牌的挑選：由于抗體質量的異質化，關于抗體的品牌挑選就被我們所重視，可是不論是什么品牌都難免會遇到不合適自己試驗的抗體。所以一般主張考慮那些業內遍及認可、購買便利、專業、售后處理快捷的品牌。一些乃至都沒有正式署理的，只能備選。一起購買時必定要找能夠供給產品輔導、試驗剖析、售后處理的正規署理商購買，防止由于買到假貨水貨影響試驗。
五、關于其他一些小細節：抗體挑選與運用過程中，多少還會遇到一些意想不到的工作。有些細節，仍是需求多留意一些。如在挑選做阻斷或中和試驗時，有時需求將抗體加到細胞培養液中，這是需求留意抗體是否含有疊氮鈉。如果是大包裝的抗體，進行分裝是比較節約的辦法，如果是價的，能夠配成母液再分裝。抗體的短時刻運送，用普通冰塊堅持溫度是能夠滿足要求的。別的不要糾結于WB過程中分子量的問題。許多時分，我們看到相同的抗體，不同的品牌，乃至同一品牌不同的貨號，標注的分子量都不一樣。其實可能僅僅生產商只檢測時運用了不同的種屬不同的樣品類型，或是參照了不同的文獻，對運用者來說，相同的樣品，不論運用哪個品牌的，只需抗體是對的，意圖條帶只會出現在相同的方位。關于分子量的問題，一般不主張看產品闡明，WB中條帶的方位由樣品決議，并不會由于抗體不同而不同。所以在檢測蛋白之前，我們能夠經過數據庫或參考文獻，對即將檢測的蛋白做個比較全面的了解，包含其可能剪切與潤飾的狀況、表型的狀況等。在*次運用一個新的抗體時，不要依據分子量橫向剪膜，能夠保留幾個全泳道，看看條帶方位或散布的狀況。- 上一篇：ELISA加樣步驟怎樣放錯Z有效？
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